一般情況下,血清沉淀不會影響細(xì)胞培養(yǎng)效果,但是出于一致性等方面的考慮,還應(yīng)盡可能減少在使用或運(yùn)輸過程中,人為因素導(dǎo)致的血清沉淀。
1、正確的運(yùn)輸溫度:運(yùn)輸過程中,要嚴(yán)格-20℃低溫,避免反復(fù)凍融。
2、使用正確的融化方法:在使用時,正確的解凍方法也很重要,這里推薦使用國際上通用的“三步法"解凍。
操作 | 溫度 | 100ml | 500ml | 1000ml |
第1步 | 室溫 | 35 min | 90 min | 100 min |
或15-20℃水浴 | 5 min | 18 min | 20 min | |
第2步 | 20℃水浴 | 15 min | 25 min | 30 min |
第3步 | 37℃水浴 | 20 min | 35 min | 45 min |
需要注意的是,如果血清是儲存在-80℃冰箱中,正式解凍前應(yīng)先轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中過渡。一次解凍后,分裝至無菌離心管中,盡量保證每管是一次的用量,分裝管解凍也遵循三步法,解凍后需全部用完。
3、使用正確的儲存方式:長期儲存在 2-8℃或在室溫下放置時間過長,都會引起沉淀,建議配制好的培養(yǎng)基在4℃冰箱中存放不要超過7天,血清分裝好后-20℃儲存。
4、特殊的處理:γ射線照射與熱滅活也容易引起沉淀析出,因此要注意射線照射劑量以及熱滅活方法(40℃水浴加熱20分鐘即可)。常規(guī)實(shí)驗(yàn)中用到的胎牛血清,無需熱滅活。
那么,如果想去除細(xì)胞培養(yǎng)過程中,血清中沉淀,又該如何操作呢?
如果要除去血清中的沉淀,可以將血清分裝至無菌離心管中,大約400g 離心,留上清即可。由于濾膜容易被沉淀堵塞,因此不建議用過濾的方法。
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