動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)自上世紀(jì)初出現(xiàn)以來，經(jīng)歷了一個(gè)多世紀(jì)的發(fā)展，獲得了很大的進(jìn)步。不僅建立了許多細(xì)胞系和培養(yǎng)了許多類型的原代細(xì)胞，而且開發(fā)了人工合成培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基，并且出現(xiàn)了細(xì)胞工程，哺乳動(dòng)物細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)獲得了工業(yè)化的應(yīng)用，用于生產(chǎn)重組蛋白、單克隆抗體等生物藥、載體病毒、病毒性疫苗等。開發(fā)了微載體、中空纖維管和生物反應(yīng)器等，并且實(shí)現(xiàn)了一種不同以往的培養(yǎng)方式——灌注培養(yǎng)。目前，灌注培養(yǎng)已成為高產(chǎn)率培養(yǎng)細(xì)胞的主要方法。

灌注培養(yǎng)是一種動(dòng)態(tài)培養(yǎng)，可提供不斷流動(dòng)的培養(yǎng)液和消除有害的代謝產(chǎn)物。它包括蠕動(dòng)泵、熱板、組織載體、氣體擴(kuò)張器、配套的培養(yǎng)瓶和管子。蠕動(dòng)泵用于控制通過培養(yǎng)箱的培養(yǎng)液流速。熱板向培養(yǎng)箱提供37 ℃的維持溫度。氣體擴(kuò)張器用于消除管道中的氣泡。

灌注培養(yǎng)有四個(gè)特點(diǎn)：一是能及時(shí)地補(bǔ)充營養(yǎng)物質(zhì)和排出代謝產(chǎn)物，有利于細(xì)胞的擴(kuò)增，實(shí)現(xiàn)高密度培養(yǎng)；二是提供穩(wěn)定的環(huán)境，有利于細(xì)胞的持續(xù)增殖；三是可實(shí)現(xiàn)梯度培養(yǎng)，如梯度培養(yǎng)箱的腔面和基底面分別用不同的培養(yǎng)液灌注，更接近體內(nèi)環(huán)境，可用于體外三維組織工程的構(gòu)建。四是灌注培養(yǎng)檢測廢液中葡萄糖和乳酸濃度，進(jìn)而更清楚當(dāng)前細(xì)胞培養(yǎng)微環(huán)境情況。

在組織工程上的實(shí)踐顯示，灌注培養(yǎng)有利于體外高活性有功能軟骨組織工程的構(gòu)建。灌注培養(yǎng)得到的DN A和糖胺聚糖的含量明顯增高，比用靜態(tài)培養(yǎng)的含量多。

灌注培養(yǎng)可用含血清的培養(yǎng)基。但無血清培養(yǎng)基已成為發(fā)展的趨勢。只是無血清開發(fā)成本高，應(yīng)用范圍窄，尚未全部替代含血清培養(yǎng)基。

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參考文獻(xiàn)

唐光霞, 陳建蘇. 灌注動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)及其在組織工程中的應(yīng)用進(jìn)展.眼科新進(jìn)展.2010,30(5):486-491